瓊脂糖水平電泳儀：什么是核酸電泳？

發(fā)布時(shí)間：2022-06-22

　　瓊脂糖水平電泳儀：什么是核酸電泳？　　核酸電泳通常使用瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠兩種介質(zhì)。瓊脂糖是一種聚合鏈線性分子；聚丙烯酰胺凝膠由丙烯酰胺(Acr)在 N,N,N′-四甲基乙 二胺（TEMED）和過硫酸銨（AP）的催化下聚合形成長鏈，并通過交聯(lián)劑 N,N′-亞甲雙丙烯酰胺（Bis）交叉連接而成。瓊脂糖凝膠適合分離200bp至近50kb的DN 片段，而聚丙烯酰胺凝膠對(duì)于小片段（5bp-500bp）的分離效果很好，且分辯力極高。選擇不同濃度的凝膠，可以分離丌同大小范圍的 DNA 分子。電場強(qiáng)度愈大，帶電顆粒的運(yùn)動(dòng)赹快。但凝膠的有效分離范圍隨著電壓增大而減小，所以電泳時(shí)一般采用低電壓，不超過 6V/cm。而對(duì)于大片段電泳，可以選擇 0.5-1.0V/cm 電泳過夜。如果選擇高電壓電泳，可使用聚丙烯酰胺凝膠。　　核酸電泳常采用TAE、TBE、TPE三種緩沖系統(tǒng)。TAE價(jià)格低廉，但緩沖能力低。TPE在進(jìn)行DNA回收時(shí)，會(huì)使DNA污染磷酸鹽，影響后續(xù)反應(yīng)。所以綜合考慮，多采用TBE緩沖液。　　核酸電泳中常用的染色劑是溴化乙錠（EB）。溴化乙錠是一種扁平分子，可以嵌入核酸雙鏈的配對(duì)堿基之間。

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